Roteiro de Aula Prática 1

Roteiro de aula prática -1

Extração de DNA de células de mucosa oral

Uma boa técnica para compreender os principais reagentes atuantes no processo de extração de DNA genômico de células eucarióticas é a de extração de DNA de células da mucosa oral.

Ao final do processo você deverá compreender:

1. Qual a função do sal?
2. Qual a função do detergente?
3. Qual a função do banho a 60 °C?
4. Qual a função do gelo ?
5. Qual a função do Álcool ?

Extração de DNA de mucosa bucal (individual ou por grupo):

1. 1 copo descartável

2. 1 espátula de madeira ou cotonete

3. 15 mL de solução de sacarose a 3%

4. 1 tubo de ensaio

5 Uma proveta para 15 mL

6. Etanol absoluto gelado

7. Sal de cozinha

8. Banho à 60 °C

9. Estantes para tubos de ensaio

10. Caixa de isopor com gelo

11. 1 micropipeta de 500 μL

12. 1 mL de detergente neutro diluído a 25%

Procedimento:

1. Higienizar a boca fazendo bochechos com água ou se possível escovando os dentes.

2- Delicadamente raspar a mucosa bucal com uma espátula de madeira ou cotonete.

3- Colocar aproximadamente 15mL de água com açúcar na boca (1 colher de chá de açúcar em 100 ml de água).

4- Bochecar vigorosamente por 30 segundos

5- Recolher o volume obtido do bochecho no mesmo copo descartável. Mergulhar a espátula ou cotonete usado na raspagem da mucosa no volume obtido do bochecho.

6- Transferir apenas 5 mL do volume obtido no passo 5 para um tubo de ensaio e adicionar uma pitada de sal de cozinha. Homogenizar invertendo o tubo.

7-Adicionar 500 μL de detergente neutro diluído à 25% (1:4) e homogeneizar cuidadosamente.

8- Aquecer a 60 °C por 10 min. Resfriar 5 min no gelo.

9- Adicionar álcool gelado (absoluto se possível) pelas bordas do tubo lentamente, até que se alcance pelo menos 1cm de espessura. O DNA, insolúvel no álcool, ficará visível.